Aplicacao da tecnologia Microarray

A construção de bibliotecas de cDNA é útil na compreensão da expressão genética em organismos sob diferentes condições, mas a sequência aleatória de cDNAs imparciais é trabalhosa e dá origem a redundância. O nosso objectivo era isolar os cDNAs induzidos pela mudança de Aspergillus nidulans da glucose para polissacáridos seleccionados. Concebemos um método de Hibridação de Subtracção Negativa que envolveu o rastreio de uma biblioteca feita de cDNAs a partir de células cultivadas sob uma condição fisiológica seleccionada com sondas de cDNA rotuladas a partir de outra condição fisiológica. Num ecrã para transcrições induzidas pela mudança da fonte de carbono, foram isolados 3.532 negativos. Foram feitas experiências de microarranjo de canal único para confirmar que a maioria dos negativos foram de facto induzidos de forma diferente. Para obter informações sobre a regulação, utilizámos microarrays para identificar alterações de expressão genética após uma mudança de glucose para pectina ou inanição de glucose. Os resultados deste estudo retratam a utilização útil da poderosa tecnologia dos microarrays para estudar o perfil de expressão génica sob várias condições fisiológicas.